一:取材
撕取洋蔥鱗莖內(nèi)表皮2~3mm2置于載玻片上,用吸管加6mmoI的PBS緩沖液兩滴,使材料充分浸入到液體中,處理約5分鐘。(撕取的材料大小適中,且為內(nèi)表皮)
二:去垢處理
用吸水紙吸凈浸泡材料的PBS緩沖液,加2~3滴37°C預(yù)溫的去垢劑1%TritonX-100,使液體充分浸泡材料,并立即放入37C水浴鍋中處理15分鐘。(吸水紙不要直接在材料上面吸,以免帶丟材料,去垢處理過(guò)程中不要讓材料干燥)
三:沖洗
吸去 1%Triton,用6mmol的PBS緩沖液輕輕沖洗,反復(fù)兩至三次。
四:固定
用吸水紙吸盡PBS緩沖液,加2滴3%戊二醛固定約20分鐘。
五:沖洗
吸去3%戊二醛固定液,用6mmol的PBS緩沖液輕輕沖洗,反復(fù)兩至三次。
六:染色
吸去PBS緩沖液,滴幾滴0.2%考馬斯亮藍(lán)R250染料,染色約10分鐘。
七:制片
加蓋蓋玻片,用吸水紙吸去多余染料。(加蓋玻片時(shí)傾斜放置,避免氣泡產(chǎn)生;吸去多余染料時(shí)僅吸去蓋玻片四周溢出的染料,不要太干,以免產(chǎn)生氣泡)
八:觀察
觀察將制好的玻片置于低倍鏡下,可見到規(guī)則排列的多邊形洋蔥表皮細(xì)胞輪廓,在細(xì)胞質(zhì)中可見到被染成藍(lán)色的粗細(xì)不等的分枝狀或點(diǎn)狀結(jié)構(gòu),這就是細(xì)胞骨架。然后轉(zhuǎn)高倍鏡繼續(xù)觀察,調(diào)節(jié)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋可見到細(xì)胞骨架的立體結(jié)構(gòu)。
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