小鼠
ELISA試劑盒具有高效、快捷、易批量操作等優(yōu)點(diǎn),不同的廠家提供不同種類,不同類型的Elisa試劑盒產(chǎn)品,為科研用戶帶來(lái)極大的方便。它能夠針對(duì)特定檢測(cè)源,制備特異性抗原抗體,根據(jù)應(yīng)用需要量身定制檢測(cè)試劑盒,有效控制檢測(cè)試劑成本。
小鼠ELISA試劑盒的實(shí)驗(yàn)原理:
將目標(biāo)抗體包被于96孔微孔板中,制成固相載體,向微孔中分別加入標(biāo)準(zhǔn)品或標(biāo)本,其中的目標(biāo)連接于固相載體上的抗體結(jié)合,然后加入微生物化的目標(biāo)抗體,將未結(jié)合的生物素抗體洗凈后,加入HRP標(biāo)記和親和素,再次洗滌后加入TMB底物顯色。TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的目標(biāo)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(O.D.值),計(jì)算樣品濃度。
小鼠ELISA試劑盒操作進(jìn)程的控制:
1、嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30~60min。
2、加樣后及時(shí)放人孵箱,標(biāo)本較多時(shí),要分批操作.按說(shuō)明進(jìn)程嚴(yán)峻控制操作時(shí)間,避免孵育時(shí)間人為延伸,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗干凈。
3、封板溫育時(shí),各孔一定要封嚴(yán),避免陽(yáng)性標(biāo)本的液體蒸發(fā),發(fā)作周邊現(xiàn)象然后導(dǎo)致“花板”的出現(xiàn)。
4、用洗板機(jī)洗板時(shí),保證洗液注滿各孔,elisa試劑盒洗板針疏通,洗完板后在吸水紙?zhí)暨x潔凈無(wú)或少塵的吸水材料上輕輕拍干:還要避免針口有纖維蛋白或異物,這些異物在洗板的進(jìn)程中易發(fā)作拖帶現(xiàn)象而導(dǎo)致“花板”的出現(xiàn)。
5、合理安排檢測(cè)量,避免反應(yīng)板過(guò)多構(gòu)成洗板等候時(shí)間長(zhǎng)。
6、加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板外表輕拭吸干。
7、顯色劑盡量在臨用前制作,堅(jiān)持不用過(guò)期顯色劑,肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用。
8、加樣時(shí)保持顯色劑不外流;AB液應(yīng)避免觸摸金屬器械,加停止液時(shí)應(yīng)避免發(fā)作氣泡。
9、小鼠ELISA試劑盒應(yīng)保證C清潔,整個(gè)操作進(jìn)程中保證酶標(biāo)板不觸摸次氯酸,以上的辦法可以使“花板”降至至低極限。然后提高檢測(cè)的特異性,并得到更可靠的實(shí)驗(yàn)成果。