1. 吸附法
優(yōu)點:做作條件溫和、簡便;成本低;載體可反復使用
不足:對離子強度、pH、溫度等因子敏感,故酶易損漏,且酶轉載容量較小
2.共價偶聯(lián)法
優(yōu)點:載體與酶偶聯(lián)的方法多樣化;固定化的酶非常穩(wěn)定,損漏少
不足:偶聯(lián)試劑對生命組織多有一定毒性;偶聯(lián)條件激烈,易引起酶失效;成本較高
3.交聯(lián)法
優(yōu)點:可用的交聯(lián)試劑多,技術簡易;穩(wěn)定性較高
不足:交聯(lián)條件較激烈,常出現(xiàn)擴散限制,使用有一定難度
4.包埋法
優(yōu)點:可進行大量的固定化;包埋膜可選用生物相容材料,并可做成任意大小;膠格包埋用膠可做成所需要的厚度與硬度
不足:僅可用于低分子量的底物,不適用于柱系統(tǒng),反應常受擴散限制,不是所有單體材料與溶劑都適用于各種酶
酶固定化后一般穩(wěn)定性增加,易從反應系統(tǒng)中分離,且易于控制,能反復多次使用。便于運輸和貯存,有利于自動化生產,但是活性降低,使用范圍減小,技術還有發(fā)展空間。固定化酶是近十余年發(fā)展起來的酶應用技術,在工業(yè)生產、化學分析和醫(yī)藥等方面有誘人的應用前景。
優(yōu)點:
①固定化酶可重復使用,使酶的使用效率提高、使用成本降低。
②固定化酶極易與反應體系分離,簡化了提純工藝,而且產品收率高、質量好。
③在多數(shù)情況下,酶經固定化后穩(wěn)定性得到提高。
④固定化酶的催化反應過程更易控制。
⑤固定化酶具有一定的機械強度,可以用攪拌或裝柱的方式作用于底物溶液,便于酶催化反應的連續(xù)化和自動化操作。
⑥固定化酶與游離酶相比更適于多酶體系的使用,不僅可利用多酶體系中的協(xié)同效應使酶催化反應速率大大提高,而且還可以控制反應按一定順序進行。
缺點:
①固定化可能造成酶的部分失活,酶活力有損失。
②酶催化微環(huán)境的改變可能導致其反應動力學發(fā)生變化。
③固定化酶的使用成本增加,使工廠的初始投資增大、
④固定化酶一般只適用于水溶性的小分子底物,對于大分子底物不適宜。
⑤與完整菌體細胞相比,固定化酶不適宜于多酶反應,特別是需要輔助因子參加的反應。
⑥胞內酶進行固定化時必須經過酶的分離純化操作
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