胎牛血清的保存方法:
需要長期保存的胎牛血清必須儲存于-20℃ - 70℃ 低溫冰箱中。4℃冰箱中保存時 間切勿超過1個月。切勿將血清在 37℃放置太久,否則血清會變得渾濁,同時血清中的有效成 分會被破壞,而影響血清質(zhì)量。如果一次無法用完一瓶,可 將40~45ml分裝于無菌50ml離心 管中。由于血清結(jié)冰時體積會增加約10%,因此,血清在凍入低溫冰箱前,必須預(yù)留一 定體積 空間,否則易發(fā)生污染或玻璃瓶凍裂。
胎牛血清的使用方法:
1、瓶裝胎牛血清解凍需采用逐步解凍法:-20℃ 至 -70℃ 低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天,然后移入室溫,待全部溶解后再分裝,一般以50ml無菌離心管可分裝40~45ml。在溶解過程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一,減少沈淀的發(fā)生。切勿直接將血清從-20℃進入37℃解凍,這樣因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝集而出現(xiàn)沉淀。
2、滅活處理:熱滅活是指56℃, 30分鐘加熱已*解凍的血清,加熱過程中須規(guī)則搖晃均勻。此熱處理的目的是使血清中的補體成分滅活,除非必須,一般不建議作此熱處理,因為熱處理會造成血清沉淀物顯著增多,而且還會影響血清的質(zhì)量。補體參與反應(yīng)有:細胞毒作用, 平滑肌細胞收縮, 肥大細胞和血小板釋放組胺, 增強吞噬作用, 促進淋巴細胞和巨噬細胞發(fā)生化學(xué)趨化和活化。
3、一般廠商提供的胎牛血清為無菌,無需再過濾除菌。如發(fā)現(xiàn)血清有懸浮物,則可將血清加入培養(yǎng)液內(nèi)一起過濾,切勿直接過濾血清。
4、血清中的沉淀物絮狀物:主要是胎牛血清中的脂蛋白變性及解凍后胎牛血清中纖維蛋白造成,這些絮狀物不會影響血清本身的質(zhì)量。可用離心3000rpm,5分鐘去除,也可不用處理。 顯微鏡下"小黑點":經(jīng)過熱處理過的血清,沉淀物的形成會顯著增多。有些沉淀物在顯微鏡下觀察象"小黑點",常誤認為血清受污染。一般情況下,此小黑點不會影響細胞生長,但如果懷疑血清質(zhì)量,則應(yīng)立即停止使用,更換另一批號的血清。
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